Опыт лечения тучности методом полного голодания Д. Д. ФЕДОТОВ, Ю. С. НИКОЛАЕВ, Ю. Л. ШАПИРО, Г. И. БАБЕНКОВ, В. Б. ГУРВИЧ (Москва) Лечение ожирения остается одной из наиболее актуальных проблем современной медицины. Число больных с избыточным весом, согласно данным многих

Эритрон при длительном алиментарном голодании и последующем питании людей Н. А. ФЕДОРОВ, Ю. Л. ШАПИРО (Москва) Голодание, как частный раздел науки о питании, за последние годы вновь стало привлекать к себе пристальное внимание в связи со все более широким его

Интенсивность эритродиеретических процессов при голодании людей (математический анализ) Ю. Л. ШАПИРО, В. М. ЛУГОВСКОЙ (Москва) Как известно, при полном алиментарном голодании в течение довольно длительного времени (по крайней мере до сроков, характеризующихся потерями

Сывороточное и эритроцитарное железо при длительном голодании людей Ю. Л. ШАПИРО, Л. М. ДОНДЫШ, Л. М. ЛЕЙБИН, Э. А. ЛЕЙЗЕРОВИЧ, Л. Ф. ЛЕВИНА (Москва) Данные о содержании железа в жидкой фракции крови при полном алиментарном голодании и последующем питании немногочисленны и

Показатель степени насыщенности крови кислородом при лечебном голодании В. Б. ГУРВИЧ, Ю. Л. ШАПИРО, М. В. САМОЙЛОВА (Москва) В литературе имеется значительное число работ, посвященных изучению изменения степени насыщения крови кислородом при разнообразных условиях и

Динамика показателей периферической крови при лечебном голодании у больных гипертонической болезнью и ожирением Г. Н. БЖИШКЯН-БОРОДИНА (Москва) Литературные данные относительно исследования состава периферической крови при лечебном голодании представляют большую

Сравнительное изучение действия полного длительного голодания И белковой недостаточности на состав периферической крови мышей СС57Вr И. Л. ПОВЕРИЙ и В. И. ПРИЛЯЦКИЙ (Москва) Полное или частичное голодание является удобной экспериментальной моделью для изучения влияния

pH сыворотки крови больных при лечебном голодании В. А. СКОРИК-СКВОРЦОВА, В. А. КУЛАЧКОВ (Москва) Известно, что так называемые «жесткие константы» сохраняются неизменными в организме В течение длительного срока, несмотря на воздействие каких-либо «отклоняющих» факторов.

О действии полного длительного алиментарного голодания на хромосомный аппарат лимфоцитов периферической крови К. Н. ГРИНБЕРГ, Ю, Л. ШАПИРО, Е. А. КИРИЛОВА, Р. С. КУШНИР (Москва) Полное алиментарное голодание успешно применяется при лечении некоторых психических и

Изменение количества и некоторых параметров полового хроматина у людей в процессе полного длительного алиментарного голодания и последующего питания С. Н. РЕЗИНА, Ю. Л. ШАПИРО (Москва) Половой хроматин - внутриядерное тельце, дающее Фельген-положительную реакцию и

СОСТОЯНИЕ ИММУНОБИОЛОГИЧЕСКОЙ РЕАКТИВНОСТИ ОРГАНИЗМА ЧЕЛОВЕКА ПРИ ПОЛНОМ ДЛИТЕЛЬНОМ ГОЛОДАНИИ Ю. С. НИКОЛАЕВ, В. А. СКОРИК-СКВОРЦОВА (Москва) Изучение состояния иммунобиологической реактивности организма в период длительного полного голодания и последующего

Материалы к изучению ферментной адаптации при полном лечебном голодании А. А. ПОКРОВСКИЙ, Ю. С. НИКОЛАЕВ, Г. К. ПЯТНИЦКАЯ, Г. И. БАБЕНКОВ (Москва) В течение последних лет в нашей стране и за рубежом появилось большое число сторонников применения голодания с лечебной целью при

Изменение активности некоторых Ферментов крови и печени крыс при экспериментальном голодании А. А. ПОКРОВСКИЙ, Г. К. ПЯТНИЦКАЯ (Москва) Проблема влияния голодания на разные показатели обменных процессов в организме животных и человека продолжает привлекать внимание

Химический состав тканей крыс при полном голодании В. И. ДОБРЫНИНА (Москва) Голодание как метод лечения успешно зарекомендовал себя при некоторых психических и соматических заболеваниях (3, 7, 10-13). Особенно перспективно его применение при обменных, аллергических

Некоторые данные относительно белково-азотистого обмена в процессе лечебного голодания психически больных Л. И. ЛАНДО, Ю. С. НИКОЛАЕВ, Ю. Л. ШАПИРО, Г. Я. БАБЕНКОВ (Москва) Белково-азотистый обмен при полном алиментарном голодании как в эксперименте на животных, так и у людей

Принцип метода. Некоторые клетки белой крови (гранулоциты и в меньшей степени моноциты) способны in vitro и in vivo поглощать, а часто и разрушать чужеродные частицы с помощью своих ферментов. Причем сам процесс проходит несколько стадий, которые включают хемотаксис, фагоцитоз, разрушение микробов и переваривание поглощенных веществ. При повторном контакте или специфической иммунизации клетки опсонируются, т. е. эта способность усиливается. Разработано большое число методик определения фагоцитарной активности клеток крови. Для этих целей используют определенную тест-систему (конкретный вид микробов, зимозан). В одних случаях реакцию проводят в пробирках или чашках Петри на агаре, а в других - внутри организма животного (внутрисосудисто, интраперитенально или методом «окошка рога»).
Ход определения.
1. Приготовление тест-системы: микробная взвесь с содержанием 1-2 млрд тел в 1 мл по оптическому стандарту.
2. Смешивание 2%-ного раствора лимоннокислого натрия, крови и микробной взвеси в соотношении 1:2:1 и термостатирование 30 мин при температуре 40,5 °С.
3. Центрифугирование при 1500 об/мни 10 мин и приготовление мазков на предметных стеклах из верхнего слоя осадка и на агаре в чашках Петри.
4. Фиксация препаратов метиловым спиртом в течение 3-5 мин и окраска по Романовскому - Гимза в течение 10-15 мин.
5. Учет реакции. В окрашенных мазках под микроскопом (увеличите 90x7) подсчитывают 100 нейтрофилов или моноцитов, содержащих или нет микробов, учитывая количество микробов в клетке и степень их окраски (переваривание). Высчитывают процент фагоцитированных клеток - показатель активности, и среднее число микробов па один фагоцит - фагоцитарный индекс; отношение числа переваренных микробов к общему числу фагоцитированных клеток дает процент переваривания, а среднее их число на один фагоцит дает индекс переваривания.
Для количественной оценки переваривающей способности фагоцитов введено понятие индекса завершенности фагоцитоза. Для этого определяют отношение процента фагоцитоза, полученного через 30 мин инкубации, к проценту фагоцитоза через 2 ч и отношение фагоцитарных индексов. Принято считать, что если индекс завершенности фагоцитоза больше 1, то фагоцитоз завершенный, если меньше - то незавершенный. Для оценки степени повышения фагоцитозной активности лейкоцитов при специфической иммунизации высчитывают опсонофагоцитарный индекс по отношению фагоцитарных чисел у иммунизированных и контрольных животных. У новорожденных животных целесообразно вычислить элиминирующую способность лейкоцитов крови по абсолютному числу фагоцитированных микробов всеми фагоцитами, содержащимися в 1 мкл крови, т. е. получить абсолютные показатели.

Исследование фагоцитарной активности лейкоцитов – анализ крови, который направлен на определение резервных возможностей нейтрофилов и моноцитов к выполнению их основной функции – поглощению и переработке чужеродных агентов. Тест выполняется в комплексе иммунограммы. Он показан пациентам с рецидивирующими и хроническими инфекциями, приобретенными и генетическими иммунодефицитными состояниями, аутоиммунными и онкологическими заболеваниями, перенесшим сложные операции, в том числе по трансплантации органов. Анализу подвергается цельная кровь. Исследование основано на оценке фагоцитоза бактерий с флуоресцентными метками. В норме фагоцитирующие гранулоциты составляют от 82 до 90% от общего количества, фагоцитирующие моноциты – от 75 до 85%. Готовность результатов – до 8 дней.

Фагоцитарная активность лейкоцитов – лабораторный показатель, который отражает процент нейтрофилов и моноцитов, способных к связыванию с патогенной микрофлорой и ее перевариванию. Фагоциты – клетки, которые защищают организм от развития инфекций. Они считаются компонентом врожденного иммунитета, в крови представлены двумя видами лейкоцитов – моноцитами и нейтрофилами. Моноциты являются крупными клетками – макрофагами. Они обладают выраженной способностью к поглощению, перерабатывают большие по размерам клетки и органические соединения. В месте воспаления они фагоцитируют бактерии, лейкоцитарную массу, пораженные клетки. В результате ткани очищаются и подготавливаются к регенерации. Нейтрофилы относятся к микрофагам, в отличие от моноцитов поглощают только небольшие клетки и органические компоненты. После переработки агентов нейтрофилы гибнут, высвобождают вещества, которые повреждают бактерии и грибки, усиливают приток иммунных клеток к очагу воспаления.

Анализ крови на фагоцитарную активность лейкоцитов позволяет оценить резерв моноцитов и нейтрофилов к перевариванию чужеродных агентов. Изменение характеристик фагоцитов отражает не только иммунологическую реактивность организма, но и особенности некоторых других процессов – белкового и углеводного обмена, наличие интоксикации и истощения организма, активность восстановления после заболеваний и т. д. Таки образом, анализ применяется не только в иммунологии и инфекционистике, но и в ревматологии, онкологии, хирургии. Результаты исследования отображаются как процент активных фагоцитов к их общему количеству. Выявление активных нейтрофилов и моноцитов производится с помощью бактерий с флуоресцентными метками. Биоматериалом для исследования является цельная кровь с гепарином.

Показания

Исследование фагоцитарной активности лейкоцитов показано при подозрении на врожденный или приобретенный иммунодефицит. Оно назначается при затяжных, хронических и рецидивирующих инфекционных заболеваниях – характерном признаке снижения иммунитета. Чаще всего на анализ направляются пациенты с пневмонией, синуситом, отитом, энтероколитом, кандидозом, циститом. Также о недостаточности иммунной защиты могут свидетельствовать длительно незаживающие раны, осложнения после операций. Поэтому анализ выполняется при подготовке к хирургическому вмешательству и при осложненном течении послеоперационного периода, при длительном восстановлении после травм и ожогов. К другим показаниям для данного исследования относятся аллергические, аутоиммунные и онкологические заболевания. Результаты позволяют оценить активность иммунной защиты (фагоцитоза) и ее роль в развитии болезни.

Анализ крови на фагоцитарную активность лейкоцитов дает возможность определить фактическую готовность организма к противостоянию инфекциям. Однако стоит помнить, что этот показатель изменяется под влиянием многих факторов. Так, активность моноцитов и нейтрофилов снижается после физической нагрузки и при умственном утомлении, а после приема калорийной пищи повышается. Еще одним ограничением анализа является то, что процедура исследования занимает до 8 рабочих дней, полученные результаты отражают состояние недельной давности.

Подготовка к анализу и забор материала

Для исследования фагоцитарной активности лейкоцитов производится забор крови из вены. За день до анализа нужно исключить из рациона алкоголь, отменить спортивные тренировки и другие интенсивные физические нагрузки, избегать стрессовых ситуаций. Также необходимо проконсультироваться с врачом о влиянии принимаемых лекарств на результат исследования, возможно, некоторые препараты будут временно отменены. Процедура забора крови, как правило, производится с утра, после ночного периода голодания или через 4 часа после приема пищи.

Кровь берется из локтевой вены с помощью пункции, для исследования фагоцитарной активности лейкоцитов чаще всего используется метод оценки фагоцитоза бактерий с флуоресцентной меткой. Из крови путем центрифугирования и отмывания выделяют моноциты и нейтрофилы – исследуемый материал. Затем в образец вводят культуру люминесцентных бактерий, смесь ресуспендируют и инкубируют, по интенсивности люминесценции определяют количество лейкоцитов, фагоцитировавших бактерии. Результаты анализа подготавливаются в течение 7-8 рабочих дней. Фагоцитарная активность моноцитов и нейтрофилов может быть определена и другими методами, например, окрашиванием фагоцитировавших клеток (метод Романовского-Гимзы), по активности лизосомальных ферментов, производству цитокинов, присутствию катионных белков.

Нормальные значения

Результат анализа крови на фагоцитарную активность лейкоцитов выражается в процентах фагоцитирующих клеток от их общего количества. Значения нормы для гранулоцитов – от 82 до 90%, для моноцитов – от 75 до 85%. Эти показатели одинаковы для пациентов всех возрастов и обоих полов. Физиологическое снижение фагоцитоза может определяться во время беременности, после физической нагрузки, не соответствующей уровню подготовки, и после эмоционального стресса.

Повышение и снижение показателя

Повышение фагоцитарной активности лейкоцитов не имеет диагностической значимости, причиной могут стать острые инфекции. Активность моноцитов и нейтрофилов увеличивается относительно исходного уровня.

Анализ фагоцитарной активности лейкоцитов относится к иммунологическим методам исследования. Его показатели позволяют определить резервные способности клеток крови к поглощению и перевариванию инфекционных агентов, то есть готовность организма противостоять развитию заболевания. Если результаты анализа ниже нормы, необходимо проконсультироваться с лечащим врачом – иммунологом, инфекционистом, хирургом, ревматологом, онкологом. Физиологическое снижение показателей можно скорректировать правильным подбором физической нагрузки, профилактикой стресса.

www.krasotaimedicina.ru

Врач иммунолог-аллерголог Болибок Владимир Анатольевич

Антитела или иммуноглобулины. Иммуноглобулины представляют собой достаточно крупные и сложные молекулы белков, которые синтезируются клетками иммунной системы – плазматическими клетками. В свою очередь, плазматические клетки происходят из B-лимфоцитов. Иммуноглобулины обладают свойством связываться с чужеродными молекулами (белками, липопротеидами), находящимися как в растворенном состоянии, так и на поверхности вирусов, бактерий и т.п. Чужеродные молекулы могут находится и на мембране своих собственных клеток, если эти клетки инфицированы вирусами или мутировали. Антитела сами по себе не могут убить вирус, бактерию или клетку, или химически разрушить токсин, который выделяется бактериями. Но они могут, во-первых, их нейтрализовать, нарушить функцию или снять токсичность; во-вторых, «указывают» иммунной системе на «чужака», которого следует уничтожить. После того, как антитела прореагировали с чужеродными молекулами на поверхности вирусов, бактерий и др. объектов, в бой с ними вступают белки системы комплемента, цитотоксические Т-лимфоциты или клетки-фагоциты (нейтрофилы и моноциты-макрофаги). При этом связывание антител очень избирательно – один вид антител реагирует только с той чужеродной молекулой, против которой он вырабатывается. Это свойство называется специфичностью антител. К примеру, антитела против вируса кори не реагируют с вирусом ветряной оспы, и наоборот.

По химическому строению иммуноглобулины делятся на 5 классов:

Иммуноглобулины класса G. Это основной класс защитных антител, составляет более 80% всех антител, циркулирующих в крови и во внутренней среде организма. Иммуноглобулины класса G начинают вырабатываться примерно через 7 – 10 дней после первого контакта с незнакомой инфекцией и их уровень нарастает до максимума примерно на 30 – 40 день. Иммуноглобулины класса G долго сохраняются в крови, иногда их синтез продолжается годами и десятилетиями, и как раз они обеспечивают приобретенный иммунитет к большинству инфекций, как после заболевания, так и после вакцинации. Иммуноглобулины класса G могут проникать через плаценту к развивающемуся ребенку и накапливаться в крови ребенка перед рождением. В этом имеется глубокий смысл, т.к. ребенок с материнскими антителами приобретает и иммунитет против тех инфекций, с которыми контактирует мать в своем обычном окружении.

Иммуноглобулины класса M. Это наиболее крупные антитела, и они вырабатываются в первую очередь при контакте с незнакомой инфекцией. Иммуноглобулины класса M появляются в течение первых суток от начала инфекции, заметный уровень создается уже к 3 – 4 дню, максимум – на 7 – 10 день, и затем, после уничтожения инфекции в организме, они быстро исчезают – примерно через 4 – 6 недель. Иммуноглобулины класса M не проникают через плаценту.

Иммуноглобулины класса A. Эти так называемые секреторные антитела. Они выделяются со слизью через слизистые оболочки в дыхательные пути, по ходу желудочно-кишечного тракта, со слезной жидкостью на конъюктивы, с потом и салом на кожу. Основное предназначение иммуноглобулинов класса A – уничтожать и блокировать инфекцию до того, как она сможет проконтактировать с покровными тканями организма и препятствовать внедрению инфекции внутрь организма. Иммуноглобулины класса A не проходят через плаценту. Иммуноглобулины класса A в значительных количествах выделяются через молочные железы с грудным молоком (особенно высокая концентрация IgA в молозиве), и предохраняют слизистые оболочки новорожденного и грудного ребенка от инфекции.

Иммуноглобулины класса D. Концентрация этих антител в крови также очень низкая – менее 1%. Иммуноглобулины класса D, в отличие от остальных классов иммуноглобулинов, синтезируются не плазматическими клетками, а самими лимфоцитами, и представляют собой слущенные рецепторы с поверхности наружной мембраны лимфоцитов, по сути дела – это обломки мембраны погибших лимфоцитов. Клиническое значение этих иммуноглобулинов до настоящего времени не выяснено, поэтому их уровень обычно не проверяют.

Белки системы комплемента.

Антитела или иммуноглобулины, как сказано выше, способны связываться с вирусами и бактериями, но не способны их убивать. Способность убивать бактерии, грибки и другие клетки есть у белков системы комплемента. В системе комплемента насчитывают 9 основных и 2 дополнительных белка, все они находятся в крови и готовы немедленно вслед за антителами атаковать «чужаков». Эти белки относятся к белкам-ферментам, а именно – к протеазам. Белки системы комплемента способны, взаимодействуя между собой, собираться в своеобразную «трубочку» или «иглу», которая протыкает оболочку вируса, микроба или собственной инфицированной или ставшей чужеродной клетки именно в том месте, где прореагировали антитела. Эта «игла» носит название «мембранно-атакующий комплекс». В результате в оболочке клетки образуется дырка. С учетом того, что с микробом может одновременно прореагировать свыше 10000 молекул антител, в нем одновременно образуется такое же количество «дырок» от белков. Под электронным микроскопом поверхность клетки, которую атакуют антитела с комплементом, выглядит как лунный пейзаж, изрытый кратерами от метеоритов. Поскольку концентрация солей внутри микробной клетки выше, чем снаружи, вода через поры в мембране устремляется внутрь микробной клетки и микроб в буквальном смысле лопается, раздутый водой. Происходит лизис микроба, а его останки поедают фагоциты.

Комплемент – это оружие «быстрого реагирования». Белки системы комплемента вступают в реакцию немедленно, как только антитела обнаружат чужака. Это важно для защиты от инфекции в ранах – если активность комплемента в организме высока, то инфекция, попавшая в рану, будет уничтожена практически моментально, и рана (защищенная от дальнейшего инфицирования струпом из свернувшейся крови) не нагноится.

Лизоцим.

В организме вырабатываются специальные ферменты, способные растворять оболочку бактерий, из них самый изученный – лизоцим (мурамилпептидаза). При растворении оболочки лизоцимом микроб теряет свои патогенные свойства, не может дальше инфицировать организм и становится более легкой мишенью для антител и комплемента и более легкой «пищей» для фагоцитов.

Интерфероны.

Это особая группа белков, которую вырабатываются как клетками иммунной системы (лейкоцитами), так и другими клетками организма, чаще всего эпителиальными, если они инфицированы каким-либо вирусом. Интерфероны предохраняют любые другие клетки организма от инфицирования вирусом. Иначе любая вирусная инфекция приводила бы к тому, что инфицированными становились все клетки организма.

C-реактивный белок.

Этот белок присутствует в крови в очень незначительном количестве, но его количество увеличивается в десятки и сотни раз при появлении очага бактериального воспаления. Поэтому С-реактивный белок (читается Ц) относится к белкам «острой фазы». СРБ способен связывать и «склеивать» между собой оболочки бактерий: в процессе размножения микробы остаются склеенными между собой и образуют большой конгломерат из микробных клеток. Во-первых, это не дает микробам разноситься с током крови и лимфы по организму. Во-вторых, внутри такой «колонии» микробы не получают достаточного количества питательных веществ и их рост и размножение замедляется или останавливается вовсе. В-третьих, на налипший на оболочке микробов С-реактивный белок фагоциты реагируют повышенной активностью и начинают поглощать эти микробы с большей жадностью.

doctor-bolibok.narod.ru

Фагоцитарная активность нейтрофилов

Фагоцитарную функцию клеток периферической крови принято оценивать по проценту фагоцитирующих нейтрофилов, фагоцитарному числу (среднее число микроорганизмов, захваченных одним гранулоцитом) и абсолютному фагоцитарному показателю, который является отвлеченной величиной, полученной в результате умножения фагоцитарного числа на количество нейтрофилов, фагоцитирующих в 1 мм3 крови. Иными словами, абсолютный фагоцитарный показатель - это число микробов, которые способны поглотить нейтрофилы, содержащиеся в 1 мм3 крови. При постановке реакций фагоцитоза используют взвесь убитых микроорганизмов и кровь больного. После инкубации крови и бактерий в термостате готовят мазки, окрашивают их и оценивают поглотительную способность гранулоцитов.

Для постановки реакции фагоцитоза используют также взвесь живых микроорганизмов. В этих случаях фагоцитарная активность гранулоцитов будет в 2 - 2;5 раза ниже, чем в реакциях с убитыми бактериями. Розеткообразующие свойства нейтрофилов. В последние годы выяснено, что нейтрофилы человека имеют на поверхности своей мембраны рецепторы к ряду компонентов комплемента и Fc-фрагментам иммуноглобулинов. Установлено также наличие на мембране нейтрофилов рецепторов к эритроцитам барана.

Как и лимфоциты, нейтрофилы могут быть разделены на популяции по их способности к спонтанному розеткообразованию с эритроцитами барана и к комплементарному розеткообразованию с аллогенными эритроцитами в присутствии комплемента и иммуноглобулинов.

Постановка реакций спонтанного и комплементарного розеткообразования нейтрофилов аналогична постановке реакций спонтанного и комплементарного розеткообразования лимфоцитов. Комплементарная активность сыворотки крови. Компоненты комплемента биологически инертны, но при активации комплексом антиген - антитело приобретают свойства энзимов и играют выраженную (защитную или деструктивную) роль в иммунном цитолизе. Помимо цитолиза, комплемент непосредственно участвует в различных проявлениях неспецифической защиты организма и главным образом в различных фазах воспалительной реакции, как клеточной, так и гуморальной.

Среди этих проявлений наиболее изучена активность комплемента, приводящая к высвобождению гистамина и повышению проницаемости капилляров, управляющая хемотаксисом и повышающая фагоцитирующую способность нейтрофильных гранулоцитов, способствующая иммунному прилипанию и опсонизации фагоцитирующих частиц, нарушению клеточной стенки и т. д.

Повышая проницаемость мелких кровеносных сосудов, комплемент, по-видимому, участвует в управлении миграцией гранулоцитов.

Система комплемента представлена белковыми молекулами, которые локализуются в альфа- и бета-глобулиновых фракциях и состоит из 11 белков сыворотки крови, составляющих 9 компонентов.

Для активации системы комплемента необходимы специальные субстанции, в результате воздействия которых компоненты комплемента активируют один другого в строгой последовательности (каскадное или секвенциальное включение) двумя путями - классическим и альтернативным (или пропердиновым).

Активация по классическому пути вызывается комплексом антиген - антитело, агрегированным иммуноглобулинами классов G и М, или комплексами полианион - поликатион, таким, например, как гепарин-протаминовый комплекс. При этом первый компонент комплемента (С1) образует С1-эстеразу, которая расщепляет четвертый (С4) и второй (С2) компоненты комплемента, способствуя образованию СЗ-конвертазы классического пути.

Альтернативный путь активации комплемента является эволюционно более древним. Он наиболее важен в антибактериальном защитном механизме до того, как начнут вырабатываться специфические антитела. Активация по альтернативному пути вызывается агрегированными иммуноглобулинами классов А и Е, растворимыми и нерастворимыми полисахаридами оболочек бактерий и не требует наличия С1-, С4- и С2-компонентов комплемента.

В первой стадии на поверхности активатора образуется энзим как результат взаимодействия факторов компонента СЗ. Энзим очень лабилен, но способен расщеплять СЗ и таким образом способствовать образованию более эффективной СЗ-конвертазы. Образование СЗ-конвертазы и расщепление под ее влиянием третьего компонента комплемента являются узловыми моментами обоих путей активации.

На этой стадии происходят комплементзависимые клеточные взаимодействия. Так называемые комплементарные мосты принимают участие в индукции иммунных ответов, элиминации иммунных комплексов и контроле бактериальных инфекций. Образование таких мостов длительное время было известно как иммунное прилипание.

Этот феномен используется в тесте комплементарного розеткообразования. Оба пути активации комплемента ведут к генерации биологически активных фрагментов компонентов комплемента. Так, система комплемента активируется агентами, постоянно присутствующими в нормально функционирующем организме.

В процессе эволюции развились и механизмы контроля ее активации. Существуют два основных механизма регуляции активации комплемента. Первый присущ самой системе и заключается в лабильности СЗ-конвертазы обоих путей, что лимитирует активацию последующих компонентов комплемента, участвующих в каскадном включении активации (С5 - С9).

Второй осуществляется специальными природными белками-ингибиторами. Из них наиболее важны С1-ингибитор, который образует комплекс с фрагментом С2, не давая ему дальше расщеплять С4 и С2, и таким образом контролирует сборку СЗ-конвертазы классического пути, и СЗ-инактиватор, который служит основным контрольным белком системы комплемента, расщепляя СЗ в жидкой фазе на два гемолитически неактивных белка.

Имеются данные об изменениях в системе комплемента при различных патологических состояниях. Так, Kassel (1977) у более чем 5000 больных раком различной локализации установил дефицит комплемента и его компонентов.

Отдельные компоненты сывороточного комплемента обычно определяют методом радиальной иммунодиффузии по Манчини с использованием моноспецифических антисывороток к тому или иному компоненту. Активность комплемента оценивают также по его способности лизировать эритроциты в присутствии антител против них.

За единицу гемолитической активности комплемента принимают активность, необходимую для лизиса 50% эритроцитов в присутствии антител. Используя метод кинетического титрования, реакцию можно записать во времени. Эта реакция качественная и не дает представления о концентрациях комплемента и его компонентов.

«Коррекция иммунитета у больных раком

предстательной железы», В.А.Савинов

www.medchitalka.ru

Фагоцитарная активность лейкоцитов периферической крови у разных видов животных

ОСОБЕННОСТИ ФОРМИРОВАНИЯ РАСЦЕНОК НА ВЕТЕРИНАРНЫЕ УСЛУГИ ПРИ ОБСЛУЖИВАНИИ МЕЛКИХ ДОМАШНИХ ЖИВОТНЫХ

Трофимова Е.Н.

Учет особенностей формирования расценок на ветеринарные услуги при обслуживании мелких домашних животных обеспечивает установление научно - обоснованных расценок, которые используются в ветеринарной практике.

FEATURES OF FORMATION OF QUOTATIONS ON VETERINARY SERVICES AT

SERVICE OF SMALL PETS

The account of features of formation of quotations on veterinary services at service of small pets provides an establishment scientifically - well-founded quotations which are used in veterinary practice.

УДК 619:616 - 002.5

ФАГОЦИТАРНАЯ АКТИВНОСТЬ ЛЕЙКОЦИТОВ ПЕРИФЕРИЧЕСКОЙ КРОВИ У РАЗНЫХ ВИДОВ ЖИВОТНЫХ

Трубкин А.И., Харитонов М.В.

ФГОУ ВПО «Казанская государственная академия ветеринарной медицины имени Н.Э. Баумана»

Ключевые слова: микобактерия, штамм, фагоцитарная активность.

Key words: mycobacterium, strain, phagocytic activity.

Кровь является одним из наиболее тонких и чувствительных показателей, указывающих на функциональное состояние организма, отображающих картину борьбы его с внедрившимися микроорганизмами, гельминтами и его реактивную способность. Разработанная И.И. Мечниковым теория защитной роли фагоцитов в борьбе организма с внедрившемся в его ткани патогенными микробами явилась первым шагом к построению теории противоинфекционного иммунитета. По данным литературных источников, фагоцитоз при туберкулезной инфекции имеет неспецифический защитный характер. Однако имеется ряд наблюдений, которые свидетельствуют о том, что некоторая степень специфичности в фагоцитарных реакциях при туберкулезе все-таки имеется. Например,

А.Д. Тимофеевский, С.В. Белеволенская (1927), Г.Д. Белановский (1928) показали, что фагоцитирующие клетки перитониального экссудата, периферической крови, селезенки и легкого, иммунизированных и естественно резистентных животных не разрушаются в присутствии вирулентных микобактерий, а наоборот, подавляют их размножение.

Еще более сложным является вопрос о судьбе самих туберкулезных микобактерий, проникающих в организм, и той реакции, которую они вызывают в органах. По литературным источникам (А.С. Рабухин, 1941; Ю.А. Лебедева, С.М. Сажина, 1913 и др.) в присутствии вирулентной туберкулезной культуры сначала происходит нейтрофильный лейкоцитоз и фагоцитоз туберкулезных микобактерий нейтрофильными лейкоцитами, затем - некроз лейкоцитов, наполненных возбудителем. При этом лейкоциты от больных неспецифическими заболеваниями легких, с ограниченной формой туберкулеза, в случаях инфицирования малыми дозами туберкулезных палочек происходит усиленный переход их в лимфобласты. В то же время лейкоциты страдающих хроническими или острым течением туберкулеза подвергаются быстрому распаду.

В связи с этим, определенный интерес вызывало сравнительное изучение фагоцитарной активности лейкоцитов периферической крови у разных видов животных, в том числе у морских свинок и кроликов.

Материалы и методы. Использовали лейкоциты периферической крови здоровых животных: крупный рогаты скот, лошади, овцы, козы, собаки, кролика, морской свинки, белой крысы.

Чтобы кровь не свернулась ее гепаринизировали из расчета 4 ед. инъекционного гепарина на 1 мл крови. После предварительного перемешивания, пробирки с кровью в течение 1 часа оставляли под углом 100 при комнатной температуре. Затем пробирки ставили под углом 450 в течение 15-20 мин. при этом необходимое количество лейкоцитов для постановки опытов накапливается между эритроцитами и плазмой крови в виде тумана. Накопившиеся лейкоциты отсасывали и вносили во флаконы с содержанием по 5 мл среды 199. После легкого перемешивания полученной смеси, во флаконы вносили M. bovis штамма N14 культуры микобактерий по стандартной мутности 1 мг в 1 мл физиологического раствора.

Флаконы закрывали резиновой пробкой и после легкого перемешивания в вертикальном положении поместили в термостат при температуре 370С.

Вначале через каждые 15 мин. (15,30,45,60,75,90,105,120мин), а затем через3,4,5,6,24,48 и 72 ч. с момента инкубации делали мазки при помощи специально изготовленного для этой цели стекла под углом 200. Мазки фиксировали в насыщенном растворе двухлористой ртути 2-3 мин. и окрашивали карболовым фуксином Циля, обесцвечивали 2,5% - ным раствором серной кислоты. Для растворения эритроцитов дополнительно

обрабатывали раствором уксусной кислоты и дополнительной окраске 0,5% - ным раствором метиленовой синьки, смешанной с 0,5% - ным раствором соды.

Подсчитывали 100 полиморфно ядерных лейкоцитов, по 50 единиц с каждого края мазка, и выводили фагоцитарную активность лейкоцитов в процентах.

Фагоцитарный показатель определили следующим образом, подсчитывали количество фагоцитированных туберкулезных палочек в 100 лейкоцитах и полученное число делили на количество просмотренных лейкоцитов.

Результаты исследований. Изучение фагоцитарной активности лейкоцитов периферической крови у разных видов животных по отношению к вирулентным культурам микобактерий туберкулеза бычьего вида показало, что в первые 15 мин. после контакта лейкоцитов происходит накопление микробных тел вокруг фагоцитируемых клеток крови (аттракция), но при этом еще не наблюдали поглощение микробных тел. Через 30 мин., после введения микобактерий обнаруживалось повышение фагоцитарной активности лейкоцитов по отношению к микобактериям у всех видов животных. Как видно из таблицы 1, в первые 30 мин. значительную фагоцитарную активность проявляют лейкоциты белой крысы (9,2±2,03%; Р

У продуктивных животных высокая фагоцитарная активность лейкоцитов наблюдалась у козы 6,2±2,10% (Р

Одновременно с фагоцитарной активностью лейкоцитов был изучен фагоцитарный показатель, - количество фагоцированных микробов в 100 лейкоцитах. Данные, показывающие среднее число поглощенных микобактерий на один фагоцит представлены в таблице 2. причем, для учета интенсивности фагоцитоза все фагоцитировавшие лейкоциты разбивали на три группы: в первую входили клетки, содержащие от 1 до 10 микобактерий; в нашем случае такие клетки составляли 80%; во вторую -от10 до 20, такие клетки, составляли 15%; в третью - свыше 20 микобактерий, такие клетки составляли 5%, из всех подсчитанных клеток.

Как видно из таблицы, первоначальный фагоцитарный показатель в отношении вирулентной культуры микобактерий бычьего вида у всех животных был ниже единицы.

* 15 30 45 60 75 90 105 120 3 ч. 4 ч. 5 ч. 6 ч. 24 ч. 48 ч. 72 ч.

1. Лошадь 3 6,8 ± 1,62 3,5 ± 0,95 4,3 ± 1,10 5,8 ± 1,31 6,4 ± 1,68 8,7 ± 1,62 10,0 ± 2,71 18,5 ± 4,00 25,0 ± 3,10 28,6 ± 3,80 30,0 ± 3,22 39,0 ± 3,50 43,9 ± 7,72 48,4 ± 6,20 48,7 ± 5,20

2. Кр. рог. скот 3 5,0 ± 1,03 3,4 ± 0,93 4,8 ± 1,19 5,8 ± 1,14 5,8 ± 1,39 7,4 ± 2,31 12,2 ± 2,96 19,0 ± 3,43 26,1 ± 3,31 27,6 ± 5,19 38,8 ± 6,05 40,0 ± 6,15 41,6 ± 8,07 43,0 ± 8,11 43,2 ± 5,08

3. Овца 3 5,6 ± 1,11 0,05 4,8 ± 1,05 0,05 6,2 ± 1,21 9,2 ± 2,05 12,4 ± 3,63 15,8 ± 2,33 19,8 ± 2,91 24,2 ± 3,81 30,0 ± 4,01 33,8 ± 4,17 38,8 ± 5,26 40,0 ± 4,15 44,8 ± 5,17 49,6 ± 5,09 51,8 ± 7,11

4. Коза 3 6,4 ± 2,09 6,2 ± 2,10 7,8 ± 2,20 9,2 ± 2,81 11,0 ± 2,33 19,4 ± 3,17 23,0 ± 3,19 25,4 ± 4,21 35,8 ± 6,15 37,0 ± 5,11 40,0 ± 5,08 44,4 ± 5,19 52,0 ± 7,01 55,6 ± 7,12 60,4 ± 7,07

5. Собака 3 6,6 ± 1,15 7,8 ± 2,03 9,2 ± 2,97 12,0 ± 3,53 12,8 ± 3,31 19,8 ± 3,03 26,1 ± 3,95 31,0 ± 3,91 38,4 ± 5,05 38,2 ± 4,17 40,4 ± 6,09 43,2 ± 6,12 49,5 ± 7,05 55,8 ± 8,11 67,0 ± 8,19

6. Кролик 3 4,3 ± 1,90 2,8 ± 0,9 3.1 ± 1.01 3,8 ± 1,56 3,9 ± 1,65 5,0 ± 1,68 5,4 ± 1,35 7,4 ± 2,06 7,8 ± 2,11 9,0 ± 2,19 12,6 ± 2,51 17,8 ± 3,19 0,05 24,4 ± 4,11 0,05 27,0 ± 4,92 31,0 ± 5,15 0,05

7. М. свинка 3 2,6 ± 1,07 1,2 ± 0,32 1,5 ± 0,95 2,0 ± 1,04 2,2 ± 1,00 2,8 ± 1,04 3,4 ± 1,17 3,8 ± 1,23 4,1 ± 1,92 5.0 ± 2.00 5,6 ± 1,92 6.3 ± 2.03 11,8 ± 3,09 13,2 ± 3,19 17,2 ± 4,05

8. Белая крыса 3 8,1 ± 1,35 9.2 ± 2.03 13,0± 2,20 19,6 ± 3,35 27,6 ± 5,49 31,6 ± 5,82 37,4 ± 6,05 43,8 ± 6,11 56,6 ± 7,14 59,8 ± 8,07 65,0 ± 8,15 72,3 ± 8,03 84,4 ± 8,15 87,0 ± 9,07 87,6 ± 9,19

* - аттракция микобактерий на поверхности лейкоцитов

№ п/п Вид животных после контакта с возбудителем через:

15 30 45 60 75 90 105 120 3 ч. 4 ч. 4 ч 5 ч. 6 ч. 24 ч. 48 ч. 72 ч.

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18

1. Лошадь 3 - 0,9 ± 0,03 1,78 ± 0,86 2,82 ± 1,25 3,13 ± 1,08 3,3 ± 1,01 3.9 ± 1.10 4,07 ± 1,51 5,32 ± 1,58 5,4 ± 1,96 5,95 ± 1,05 5,96 ± 1,14 6,8 ± 1,6 8,1 ± 2,90 8,2 ± 1,70

2. Кр. рог. скот 3 - 0,9 ± 0,02 1,5 ± 0,51 2,0 ± 0,52 2,2 ± 0,91 2,8 ± 0,85 3,1 ± 1,05 3,6 ± 1,21 4,0 ± 1,65 4,8 ± 1,12 5,2 ± 2,01 5,6 ± 2,12 5,4 ± 1,36 5,6 ± 2,05 5,6 ± 2,17

3. Овца 3 - 0,8 ± 0,02 1,8 ± 0,30 2,3 ± 0,15 2,8 ± 0,65 3,3 ± 1,02 4,4 ± 1,65 5,8 ± 2,01 5,8 ± 2,11 6,4 ± 3,03 6,0 ± 3,05 6,2 ± 3,18 6,0 ± 2,31 6,8 ± 2,15 6,8 ± 3,11

4. Коза 3 - 0,8 ± 0,11 1,7 ± 0,20 2,1 ± 0,80 2,3 ± 0,7 3,8 ± 1,05 4,0 ± 2,11 4,4 ± 2,01 5,1 ± 2,03 6,4 ± 2,11 6,8 ± 2,19 6,8 ± 2,35 7,6 ± 3,05 7,8 ± 3,12 7,8 ± 3,11

5. Собака 3 0,2 ± 0,01 0,8 ± 0,05 1,7 ± 0,15 2,3 ± 0,17 3,01 ± 1,01 4,5 ± 1,17 5,9 ± 1,19 6.5 ± 2.05 7,2 ± 2,01 7,5 ± 2,10 7,8 ± 2,05 8,7 ± 3,15 9.5 ± 3.05 9,9 ± 3,41 10,1± 3,11

6. Кролик 3 0,3 ± 0,02 1,9 ± 0,3 1,9 ± 0,61 1,3 ± 0,85 2,0 ± 0,90 2,1 ± 0,80 2,6 ± 0,31 2,9 ± 0,68 2,9 ± 0,35 3,0 ± 1,05 3.0 ± 1.01 3,8 ± 1,15 3,9 ± 1,12 3,9 ± 1,05

7. М. свинка 3 - 0,1 ± 0,01 1,2 ± 0,3 1,6 ± 0,03 1,9 ± 0,2 1,1 ± 0,30 1,3 ± 0,9 1,3 ± 0,12 1,8 ± 0,75 1,9 ± 0,90 1,9 ± 0,85 2,0 ± 0,64 2,6 ± 1,01 2,6 ± 1,00 2,7 ± 0,45

8. Белая крыса 3 0,3 ± 0,1 0,9 ± 0,05 1,0 ± 0,04 2,8 ± 0,31 3,6 ± 1,15 5,3 ± 1,36 6,8 ± 2,02 7,5 ± 2,33 8,8 ± 2,14 9.0 ± 3.00 9,2 ± 3,06 9,1 ± 2,95 9,9 ± 2,12 10,0 ± 3,01 10,3 ± 3,05

По мерее срока культивирования клеток показатель фагоцитоза достоверно (Р

ФАГОЦИТАРНАЯ АКТИВНОСТЬ НЕЙТРОФИЛОВ КРОВИ ЧЕЛОВЕКА В ГИПОТОНИЧЕСКИХ СРЕДАХ В ПРИСУТСТВИИ АНТИБИОТИКОВ

PHAGOCYTIC ACTIVITY OF NEUTROPHILS OF HUMAN BLOOD IN HYPOTONIC MEDIUM BY ANTIBIOTIC ACTION

А.А. Мищенко, Э.М. Савельева

A.A. Mischenko, E.M. Savelyeva

Исследована фагоцитарная активность нейтрофилов крови человека в гипотонической среде и в присутствии ряда антибиотиков. Снижение тоничности в 1.5 -2.0 раза вызывает увеличение параметров фагоцитоза на 16%. В присутствии фуросемида действие гипотонии не проявляется. Различные антибиотики вызывают сильное ингибирование фагоцитоза.

Phagocytic reaction of human neutrophils in the hypotonic medium and at presence of antibiotics was investigated. Tonicity decrease of medium in 1.5 - 2 times causes increase of phagocytosis parameters on 16 %. At furosemide presence action of a hypotonia is not shown. Various antibiotics caused strong inhibition of phagocytosis.

Ключевые слова: нейтрофил, фагоцитоз, фагоцитарная активность, гипотония.

Key words: neutrophil, phagocytosis, phagocytic activity, hypotonycity.

Введение

Основным барьером на пути проникновения инфекции в организм служат слизистые оболочки. Будучи многокомпонентными системами, они принимают участие во многих реакциях организма, в том числе в иммунных. В норме в слизистой оболочке содержатся иммуноглобулины и небольшое количество нейтрофилов и макрофагов . Именно эти клетки первыми контактируют с патогенами, в случае же проникновения последних в толщу тканей барьером становятся лимфоидные скопления в толще слизистых.

Поскольку поверхности слизистых оболочек не изотоничны плазме крови, для оценки функционирования клеток иммунной системы в таких условиях целесообразно провести эксперименты в анизотоничной среде in vitro. Так, показано, что в гипотонических растворах в лейкоцитах активируется кислородный взрыв, метаболизм арахидоновой кислоты, увеличивается концентрация ионов кальция . В нашей работе проведены исследования фагоцитарной активности нейтрофилов крови при моделировании гипотонических условий. Поскольку в случае воспалительного процесса в организме врачами часто назначается антибиотиковая терапия, исследовано также действие антибиотиков различных классов на фагоцитарную активность нейтрофилов крови.

Объекты и методы

В экспериментах использована венозная кровь мужчин доноров, полученная из Республиканской станции переливания крови (г. Сыктывкар). По 500 мкл крови помещали в лунки планшета для иммунологических реакций. В каждую лунку добавляли суспензию дрожжевых клеток (ООО «саф-Нева»), предварительно отмытых трижды 0.9% раствором NaCl. Количество дрожжевых клеток в среднем составляло 30 тыс./1 мкл крови.

Для снижения тоничности в 2.0 и 1.5 раза в лунки добавляли дистиллированную воду (рН 7.4). В ряде экспериментов в лунки с изо- и гипотонической средами добавляли также фуросемид в концентрации 1*10-5 Моль/л.

В экспериментах с антибиотиками в лунки добавляли линкомицин, цефтриаксон, амоксиклав и гентамицин в концентрации 30 мг/л.

Пробы инкубировали в термостате при 370С в течение 20 мин. Затем планшет помещали на лед для остановки реакции фагоцитоза и с каждой лунки готовили по 3 мазка. После просушивания и фиксации мазки окрашивали по Гимза-Романовскому, просматривали под микроскопом при иммерсионном увеличении 15*90.

Подсчитывали: 1) фагоцитарную активность - количество активных нейтрофилов из 100 встреченных при просмотре; 2) фагоцитарный индекс -среднее количество дрожжевых клеток, поглощенных одним нейтрофилом. Результаты обработаны метолом парных сравнений, достоверность различий между выборками оценивали по критерию Вилкоксона .

Результаты и обсуждение

В контроле фагоцитарная активность лейкоцитов человеческой крови составила 49.5±5%, фагоцитарный индекс - 1.64±0.1(n=20). Данные согласуются с результатами, полученными при изучении фагоцитоза патогенной Candida crusei . Фагоцитарная активность нейтрофилов в данных условиях стимулируется Р-глюканами в клеточной стенке дрожжей, к которым на поверхности фагоцитов имеются рецепторы , а также опсонизирующим эффектом имеющихся в плазме крови компонентов системы комплемента C3bi и иммуноглобулинов IgG .

При снижении тоничности среды в 1.5 и 2.0 раза (n=20) фагоцитарная активность увеличилась в среднем на 16.5%, составив 58.1±9.1% (p<0.05). Увеличился также фагоцитарный индекс до 1.97±0.06 и 2.14±0.58 при снижении тоничности в 1.5 и 2.0 раза соответственно. Таким образом, гипотония вызвала активацию фагоцитоза, что отразилось в увеличении как доли активных клеток, так и скорости поглощения фагоцитами дрожжей. Одним из механизмов такого

действия гипотонии может быть увеличение концентрации внутриклеточного кальция , в результате чего изменяется цитоскелет клеток, их подвижность и фагоцитарная активность. Кроме того, активность клеток в этих условиях может меняться в результате запуска реакции регуляторного уменьшения объема, RVD, в ответ на набухание клеток . С целью исключить влияние последнего было проведено ингибирование фуросемидом K+,Cl" - котранспорта, активация которого приводит к RVD. Поскольку вещество меняет хемотаксическую активность клеток , предварительно было исследовано его влияние в изотонической среде. При этом фуросемид не изменял фагоцитарную активность нейтрофилов (n=20), что согласуется с опубликованными данными . На фоне гипотонической среды фуросемид не изменял фагоцитарную активность по сравнению с контролем и снижал ее по сравнению с результатами в гипотонической среде в отсутствие вещества (p<0.05). В частности, в присутствии фуросемида фагоцитарная активность и фагоцитарный индекс составили 45.9±6.7%; 1.83±0.1 и 50.5±5.6%; 1.7±0.1 соответственно при

гипотонии 1.5 и 2.0. Следовательно, блокируя реакцию RVD, фуросемид тем самым предотвращал активацию клеток в условиях гипотонии.

Под действием антибиотиков показатели фагоцитарной активности снизились. При действии цефтриаксона фагоцитарная активность снизилась на 78% до 10±2.3 % (р<0.02), амоксиклав - на 70% до 17±3.9% (р<0.02), линкомицин - на 65% до 16±4.9% (р<0.02), гентамицин - на 76% до 11±3.6% (р<0.02). Фагоцитарный индекс в экспериментах с антибиотиками практически оставался неизменным, следовательно, данные препараты не влияют на скорость поглощения клеток.

Повышение фагоцитарной активности под влиянием антибиотиков отмечено в ряде работ . Согласно другим данным, фагоцитарная активность лейкоцитов подавляется при действии таких антибиотиков, как ауреомицин . Окситстрациклин, эритромицин, хлорамфеникол, полимиксин В не вызывают заметных изменений фагоцитарной активности лейкоцитов .

Используемые в опытах антибиотики по действию относятся к разным группам. Амоксиклав и цефтриаксон действуют как бактерицидные препараты (ингибируют развитие клеточной стенки, причем подавляют синтез специфического для клеточной стенки бактерий пептидогликана - муреина). Линкомицин и гентамицин при низких концентрациях действуют как бактериостатики и бактерицидно - при увеличении концентрации (ингибируют синтез белка за счет связывания с 50s и 30 s субъединицами рибосомы). Все антибиотики в наших экспериментах оказали ингибирующий эффект на нейтрофилы. Это может быть связано с изменением структуры

антибактериальных препаратов вследствие метаболических процессов в организме, в результате чего продукты метаболизма становятся токсичными для

самих фагоцитов . Антибиотики являются одной из главных причин нейтропении и агранулоцитоза. Данный эффект оказали пенициллины, цефаллоспорины и сульфаниламиды . Аминогликозид гентамицин увеличивает образование лизосом, содержащих различные факторы вирулентности . Представители Р-лактамных антибиотиков, амоксиклав и цефтриаксон, могут подавлять реакцию окислительного взрыва .

Данные о действии линкозаминов, к которым относится используемый линкомицин, на фагоцитарную активность противоречивы . При разных концентрациях препарата авторы отмечают как повышение фагоцитарной активности, так и ее снижение либо отсутствие изменений. Возможно, используемая в наших экспериментах концентрация антибиотиков была токсичной для клеток.

1. В контроле фагоцитарная активность и фагоцитарный индекс составили соответственно 49.5±5% и 1.64±0.1.

2. Замена изотоничной среды на гипотоничную вызывает увеличение как фагоцитарной активности, так и фагоцитарного индекса соответственно на 16.5 % и в 1.5-2 раза.

3. В присутствии фуросемида действие гипотонии на фагоцитарную активность нейтрофилов не проявляется.

4. Антибиотики цефтриаксон, амоксиклав, линкомицин и гентамицин вызывают ингибирование фагоциратной активности нейтрофилов на 78%, 76%, 65 % и 70% соответственно.

1. Алешина Е.Н. Изучение действия аморфного и кристаллического пени-циллинов на чумной микроб // Тр. Ростовского-на-Дону ПЧИ. Ростов-на-Дону, 1959. Т. 15. Вып. 1. С. 153-160.

2. Арефьева Н.А., Азнабаева Л.Ф. Иммунные реакции слизистой оболочки носа: цитологическая диагностика, методы лечения // Consilium Medicum. 2009. Т. 11. №11. С. 30-33.

3. Израэльсон М.И., Шполянский Б.И., Боевская Г.И. Влияние пенициллина на функциональную способность ретикуло-эндотелиальной системы и фагоцитарную активность лейкоцитов // Журн. микр. эпид. и иммун. 1951. № 3. С. 59-62.

4. Лакин Г.Ф. Биометрия. М.: Высш. школа, 1980. 291 с.

5. Финкель Е.А., Луцкая С.И. Аутовакцинотерапия при туберкулезе: Монография. Кыргызстан, 1972. 154 с.

6. Bazzoni F., Cassatella M.A., Laudanna C., Rossi F. Phagocytosis of opsonized yeast nduces tumor necrosis factor - alpha mRNA accumulation and protein release by human polymorphnonuclear leucocytes // J. Leukoc. Biol. 1991. V. 50. № 3. P. 223-228.

7. Czop J.K., Valiante N.H., Janusz M.J. Phagocytosis of particulate activators of the human alternative complement pathway thought monocyte beta-glucan receptors // Prog. Biol. Res. 1989. V. 297. P. 287-296.

8. De Weck A.L. Pharmacologic and immunochemical mechanisms of drug hypersensitivity // Immunol Allergy Clin North Am. 1991. № 11. Р. 461-474.

9. Gilliland B.C. Drug-induced autoimmune and hematologic disorders // Immunol Allergy Clin North Am. 1991. № 11. Р. 525-553.

10. Hiura M., Ozawa M., Othsuka T. a. o. Stimulation of superoxide anion production in guinea pig polimorphonuclear leucocytes by hypotonic condition with protein kinase C activators // Arch. Biochem. Biophys. 1991. C. 15. № 291. P. 31-37.

11. Kishi K., Hirai K., Hiramatsu K., Yamasaki T., Nasu M. Clindamycin suppresses endotoxin released by ceftazidime-treated Escherichia coli O55: B5 and subsequent production of tumor necrosis factor alpha and interleukin-1 beta // Antimicrob Agents Chemother. 1999. V. 43. № 3. Р. 616-22.

12. Kovaks T., Stas I. et al. Volume regulatory mechanisms of human granulocytes in hipoosmotic media // Acta Biochim. Biophys. Hung. 1989. V. 24, № 1-2. P. 142-147.

13. De Weck A.L. Pharmacologic and immunochemical mechanisms of drug hypersensitivity // Immunol Allergy Clin North Am. 1991. № 11. Р. 461-474.

14. Labro M.T. Pharmacology of spiramycin in comparison with other macrolides // Drug Invest 1993. 6. Suppl 1. Р. 15-28.

15. Lachani M., Usmani S. et al. In vitro effect of furosemideon hemiluminescence of polymorphonuclear neutrophils in preterm infants // Biol.Neonate. 1997. V. 72. № 3. P. 142147.

16. Muniz-Junqueira MI, Mota LM, Aires RB, Junqueira LF Jr. Digitalis inhibits and furosemide does not change the in vitro phagocytic function of neutrophils of healthy subjects // Int Immunopharmacol. 2003. V. 3. № 10-11. P. 1439-1445.

17. Munoz J., Geister R. Inhibition of phagocytosis by aureomycin // Proc. Soc. Exp. Biol. Med. 1950. V. 75. № 2. Р. 367-370.

18. Richardson M.D., Donaldson F. Interaction of Candida crusei with human neutrophils in vitro // J. Med. Microbiol. 1994. V. 41, № 6. P. 380-388.

19. Vetvica V., Thornton B.P., Ross C.P. Soluble beta-glucan polysaccharide binding to the lectin site of neutrophil or natural killer cell complement receptor type 3 (CD 11b/CD 18) generates aprimed state of receptor capable of mediating citotoxicity of IC3b - opsonized target cells // J. Clin. Invest. 1996. V. 98. P. 50-61.

Исследование фагоцитарной активности лейкоцитов – анализ крови, который направлен на определение резервных возможностей нейтрофилов и моноцитов к выполнению их основной функции – поглощению и переработке чужеродных агентов. Тест выполняется в комплексе иммунограммы. Он показан пациентам с рецидивирующими и хроническими инфекциями, приобретенными и генетическими иммунодефицитными состояниями, аутоиммунными и онкологическими заболеваниями, перенесшим сложные операции, в том числе по трансплантации органов. Анализу подвергается цельная кровь. Исследование основано на оценке фагоцитоза бактерий с флуоресцентными метками. В норме фагоцитирующие гранулоциты составляют от 82 до 90% от общего количества, фагоцитирующие моноциты – от 75 до 85%. Готовность результатов – до 8 дней.

Фагоцитарная активность лейкоцитов – лабораторный показатель, который отражает процент нейтрофилов и моноцитов, способных к связыванию с патогенной микрофлорой и ее перевариванию. Фагоциты – клетки, которые защищают организм от развития инфекций. Они считаются компонентом врожденного иммунитета, в крови представлены двумя видами лейкоцитов – моноцитами и нейтрофилами. Моноциты являются крупными клетками – макрофагами. Они обладают выраженной способностью к поглощению, перерабатывают большие по размерам клетки и органические соединения. В месте воспаления они фагоцитируют бактерии, лейкоцитарную массу, пораженные клетки. В результате ткани очищаются и подготавливаются к регенерации. Нейтрофилы относятся к микрофагам, в отличие от моноцитов поглощают только небольшие клетки и органические компоненты. После переработки агентов нейтрофилы гибнут, высвобождают вещества, которые повреждают бактерии и грибки, усиливают приток иммунных клеток к очагу воспаления.

Анализ крови на фагоцитарную активность лейкоцитов позволяет оценить резерв моноцитов и нейтрофилов к перевариванию чужеродных агентов. Изменение характеристик фагоцитов отражает не только иммунологическую реактивность организма, но и особенности некоторых других процессов – белкового и углеводного обмена, наличие интоксикации и истощения организма, активность восстановления после заболеваний и т. д. Таки образом, анализ применяется не только в иммунологии и инфекционистике, но и в ревматологии, онкологии, хирургии. Результаты исследования отображаются как процент активных фагоцитов к их общему количеству. Выявление активных нейтрофилов и моноцитов производится с помощью бактерий с флуоресцентными метками. Биоматериалом для исследования является цельная кровь с гепарином.

Показания

Исследование фагоцитарной активности лейкоцитов показано при подозрении на врожденный или приобретенный иммунодефицит. Оно назначается при затяжных, хронических и рецидивирующих инфекционных заболеваниях – характерном признаке снижения иммунитета. Чаще всего на анализ направляются пациенты с пневмонией, синуситом, отитом, энтероколитом, кандидозом, циститом. Также о недостаточности иммунной защиты могут свидетельствовать длительно незаживающие раны, осложнения после операций. Поэтому анализ выполняется при подготовке к хирургическому вмешательству и при осложненном течении послеоперационного периода, при длительном восстановлении после травм и ожогов. К другим показаниям для данного исследования относятся аллергические, аутоиммунные и онкологические заболевания. Результаты позволяют оценить активность иммунной защиты (фагоцитоза) и ее роль в развитии болезни.

Анализ крови на фагоцитарную активность лейкоцитов дает возможность определить фактическую готовность организма к противостоянию инфекциям. Однако стоит помнить, что этот показатель изменяется под влиянием многих факторов. Так, активность моноцитов и нейтрофилов снижается после физической нагрузки и при умственном утомлении, а после приема калорийной пищи повышается. Еще одним ограничением анализа является то, что процедура исследования занимает до 8 рабочих дней, полученные результаты отражают состояние недельной давности.

Подготовка к анализу и забор материала

Для исследования фагоцитарной активности лейкоцитов производится забор крови из вены. За день до анализа нужно исключить из рациона алкоголь, отменить спортивные тренировки и другие интенсивные физические нагрузки, избегать стрессовых ситуаций. Также необходимо проконсультироваться с врачом о влиянии принимаемых лекарств на результат исследования, возможно, некоторые препараты будут временно отменены. Процедура забора крови, как правило, производится с утра, после ночного периода голодания или через 4 часа после приема пищи.

Кровь берется из локтевой вены с помощью пункции, для исследования фагоцитарной активности лейкоцитов чаще всего используется метод оценки фагоцитоза бактерий с флуоресцентной меткой. Из крови путем центрифугирования и отмывания выделяют моноциты и нейтрофилы – исследуемый материал. Затем в образец вводят культуру люминесцентных бактерий, смесь ресуспендируют и инкубируют, по интенсивности люминесценции определяют количество лейкоцитов, фагоцитировавших бактерии. Результаты анализа подготавливаются в течение 7-8 рабочих дней. Фагоцитарная активность моноцитов и нейтрофилов может быть определена и другими методами, например, окрашиванием фагоцитировавших клеток (метод Романовского-Гимзы), по активности лизосомальных ферментов, производству цитокинов, присутствию катионных белков.

Нормальные значения

Результат анализа крови на фагоцитарную активность лейкоцитов выражается в процентах фагоцитирующих клеток от их общего количества. Значения нормы для гранулоцитов – от 82 до 90%, для моноцитов – от 75 до 85%. Эти показатели одинаковы для пациентов всех возрастов и обоих полов. Физиологическое снижение фагоцитоза может определяться во время беременности, после физической нагрузки, не соответствующей уровню подготовки, и после эмоционального стресса.

Повышение и снижение показателя

Повышение фагоцитарной активности лейкоцитов не имеет диагностической значимости, причиной могут стать острые инфекции. Активность моноцитов и нейтрофилов увеличивается относительно исходного уровня.

Анализ фагоцитарной активности лейкоцитов относится к иммунологическим методам исследования. Его показатели позволяют определить резервные способности клеток крови к поглощению и перевариванию инфекционных агентов, то есть готовность организма противостоять развитию заболевания. Если результаты анализа ниже нормы, необходимо проконсультироваться с лечащим врачом – иммунологом, инфекционистом, хирургом, ревматологом, онкологом. Физиологическое снижение показателей можно скорректировать правильным подбором физической нагрузки, профилактикой стресса.